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熒光金抗體使用指南和方案

更新時(shí)間:2024-06-25      點(diǎn)擊次數:182

image.png在PVN 中注射氟金后,左心室第三側的下丘腦細胞(40倍)抗體為1/50.000.

抗體的儲存和制備

您將收到裝在小瓶中的抗熒光金抗體。這是一種在兔子體內產(chǎn)生的多克隆抗體。小瓶中約有 100ml抗體溶液。應立即冷凍并儲存在寒冷(-20 攝氏度)、黑暗、干燥的環(huán)境中。一臺好的商用冰箱的冷凍室(沒(méi)有無(wú)霜功能)就足夠了。如果正確且持續地冷凍,抗體溶液可以?xún)Υ骈L(cháng)達一年。

抗體溶液應保持冷凍直至準備使用。100ml抗體的稀釋度為 1/100??贵w可在 BSA稀釋劑(50 mM KPBS、0.4% Triton、1%BSA、1%NGS)中進(jìn)一步稀釋 1/50,000至 1/100,000倍,以產(chǎn)生 50ml至 100ml 的工作滴度。這意味著(zhù)您可以將收到的溶液稀釋 500 至 1,000 倍。如果您使用 Vector elite 試劑盒,這應該可以處理 300至 1000個(gè)切片。制備后,抗體溶液可在陰涼(4攝氏度)、黑暗干燥的環(huán)境中保存長(cháng)達七天。優(yōu)質(zhì)商用冰箱的冷藏室就足夠了。我們不建議在制備后七天后使用該溶液。請勿重新冷凍抗體溶液。

抗體的使用

熒光金可通過(guò)多種不同方法注射,包括壓力法、離子電滲法和各種研究人員開(kāi)發(fā)的其他應用。參見(jiàn) Schmued 和 Fallon 的《熒光金:一種具有多種*特特性的熒光逆行軸突示蹤劑》,《腦研究》,377(1986)147-154,以及 Pieribone 和 Aston-Jones 的《熒光金在研究深部腦核傳入神經(jīng)中的離子電滲應用》,《腦研究》,475(1988)259-271。許多研究人員已經(jīng)開(kāi)發(fā)出自己的改良程序??贵w的使用不應依賴(lài)于使用熒光金的方法。

注射熒光金后,將漂浮切片(我們使用了灌注了 4%甲醛的大鼠的 30 微米切片)與熒光金抗體溶液在4攝氏度下孵育過(guò)夜。清洗切片,然后在室溫下以 1/1000 的比例在生物素化 GAR(Vector Labs)中孵育1小時(shí),然后再次清洗。然后將切片以 1/1000 的比例在親和素/生物素(Vector Labs)中孵育1小時(shí),清洗并轉移到 01M酷酸鈉中的二氨基聯(lián)苯胺(0,04%)和化鎳(2.5%)中,加入 0.06%H202 六分鐘。然后清洗、安裝、干、脫水并蓋上蓋片。

根據我們的經(jīng)驗,如果按照上述方式儲存和制備,如果您:使用 Vector elite 試劑盒,每瓶抗體應該可以治療 300到 1000 個(gè) 30 微米的白化大鼠腦切片(或類(lèi)似大小的動(dòng)物)。但是,您應該嘗試不同的濃度和程序,以確定哪種*適合您的情況。

Ki-67 抗體-W 使用指南和方案

一般的:

Ki-67 抗體-W與 Ki-67 蛋白發(fā)生反應。Ki-67蛋白是持續細胞增殖的內在標記,存在于細胞周期的所有活躍階段(G1、S、G2 和有絲分裂),而不存在于靜息細胞(GO)中。這意味著(zhù)它是確定特定細胞群生長(cháng)分數的極*標記。它廣泛用于診斷、研究和藥物發(fā)現區用。Ki-67 抗體-W 是多克隆抗體,在兔子體內培養成人類(lèi)肽序列-TPKEKAOALEDLAGEKELFOT-它在注射到兔子體內之前通過(guò)戍二醛與甲狀腺球蛋白偶聯(lián)。我們的抗體已用于大鼠和人腦組織的免疫細胞化學(xué)。它將與吸收特定肽的濾紙一起出售,用于阻斷。這使研究人員能夠確認特定信號

Ki-67 抗體-W 的表征

image.png

A.7日齡大鼠海馬中的 Ki-67 陽(yáng)性細胞(10X)B.共聚焦顯微鏡下拍攝的海馬中的 Ki-67細胞(60X)

C.海馬中的 Ki-67 阻斷 (10X)

通過(guò)阻斷研究確定特異性。將7日齡大鼠海馬的相鄰切片與 Ki-67 抗體-W單獨孵育(A-10X)和(B-60X)或與Ki-67抗體-W與Ki-67 肽預孵育(C-10X)-起孵育。注意 A和 B 中的標記以及 C 中的無(wú)標記,表明抗體結合的特異性。

儲存和準備:

您收到的藥瓶中含有約 200ml 溶液,稀釋度為 1/100。Ki-67Antibody-W可在 BSA稀釋劑(50mM KPBS、0.4% Triton、1%BSA、1%NGS)中進(jìn)一步稀釋至至少 1/20.000。

抗體應儲存在-20C下。還包括用特定肽吸附的濾紙以進(jìn)行陽(yáng)斷??蓪?500ul稀釋抗體加入管中以達到 10uM 陽(yáng)斷。在應用于組織之前,在室溫(RT)下孵育至少1小時(shí)。該抗體特異性地阻斷此肽,而不會(huì )阻斷濾紙上吸附的其他肽。

勢議:

將新鮮冷凍的 10-30 微米切片在室溫下用 4%多聚甲醛(EA)固定1小時(shí),用磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)清洗,然后在 90C下用 10% 檸學(xué)酸鈉處理 40 分鐘。將切片在檸標酸鈉溶液中冷卻 20 分鐘,用 PBS 清洗,并與 PBS 中的 0.至 0.3% H202 一起孵育 10 至 30分鐘。再次用 PBS 清洗組織,然后用親和素/生物素陽(yáng)斷試劑盒(Vector-cat #SP-2001)處理,清洗后在室溫下用 BSA 稀釋劑孵育1小時(shí)。將 Ki67抗體(1/20,000)在室溫下過(guò)夜應用于組織。用 PBS 清洗后,將切片在1/1000 生物素化的 GAR(Vector labscat#BA1000)中在室溫下孵育1小時(shí),清洗后在 1/1000親和素/生物素(Vector labs-cat#PK6100)中在室溫下孵育1小時(shí)。

Ki-67 抗體-W也適用于 Fluorochrome,LLG銷(xiāo)售的 BRDU 抗體-W可視化方案。但是,可以使用 4% FA 灌注組織代替新鮮冷凍切片。

出版物:

Perez 等人,《神經(jīng)科學(xué)雜志》,2009年5月13日:29(19):6379-6887Garcia-Fuster等人,正在準備中:實(shí)驗者注射可*因后成人海馬神經(jīng)發(fā)生的個(gè)體差異。

GEAP 抗體-W 使用指南和方案

概述:

GFAP 抗體-W 與膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)發(fā)生反應,GFAP是 I 類(lèi)中間絲,是星形膠質(zhì)細胞中中間絲的主要成分,可作為成熟膠質(zhì)細胞的細胞特異性標記。它可用作神經(jīng)干細胞和星形膠質(zhì)細胞的標記,包括許多類(lèi)型的源自表達 GEAP 的星形膠質(zhì)細胞的腦腫瘤。GEAP 抗體-W是多克峰抗體,在兔子體內培養成肽序列 NAGEKETRASERAE(人、大鼠和小鼠),通過(guò)成二醛與甲狀腺球蛋白偶聯(lián),然后注射到兔子體內。我們的抗體已用于大鼠和人腦組織的免疫細胞化學(xué)。它還將與吸收特定肽的濾紙一起出售,用于陽(yáng)斷。這使研究人員能夠確認特定信號。

GFAP 抗體-W 的表征

image.png

A.成年大鼠海馬中的 GFAP 膠質(zhì)細胞 (10X)

B.共聚焦顯微鏡下拍攝的海馬中的 GFAP 膠質(zhì)細胞(60X)

C.海馬中的 GEAP 陽(yáng)斷 (10)

通過(guò)陽(yáng)斷研究確定特異性。將成年大鼠海馬的相鄰切片單獨與 GEAP 抗體-W(A-10X)和(B-60X)一起孵育,或與 GEAP抗體-W與 GFAP 肽預孵育(C-10X)一起孵育。注意膠質(zhì)細胞中的A和 B標記以及 C 中無(wú)標記,表明抗體結合的特異性。

儲存和準備:

您收到的試劑瓶中含有約 200ul稀釋度為 1/100 的抗體??贵w可在 BSA稀釋劑(50mM KPBS、0.4% Triton、1% BSA、1%NGS)中進(jìn)一步稀釋至至少 1/30,000。

抗體應儲存在 -20C下。還包括用特定肽吸附的濾紙以進(jìn)行陽(yáng)斷??蓪?500ml 稀釋抗體加入試管中以達到 10 uM 阻斷。在應用于組織之前,在室溫(RT)下孵育至少1小時(shí)。該抗體可特異性地阻斷此肽,而不會(huì )阻斷濾紙上吸附的其他肽。

協(xié)議:

將新鮮冷凍的 10-80 微米切片在室溫下用 4%多聚甲醛(FA)固定1小時(shí),在磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)中清洗,并與 PBS 中的 0.1至0.3% H202 一起孵育 10 至 30分鐘。再次在 PBS 中清洗組織,然后用親和素/生物素陽(yáng)斷試劑盒(Vector-cat #SP-2001)處理,清洗后在室溫下用 BSA稀釋劑孵育1小時(shí)。將 GEAP 抗體-W(1/30,000)在室溫下應用于組織過(guò)夜。在 PBS 中清洗后,將切片在室溫下在 1/1000 的生物素化 GAR (Vector labs-cat#BA1000)中孵育1小時(shí),清洗后在室溫下在 1/1000 的親和素/生物素(Vector labs-cat#PK6100)中孵育1小時(shí)。清洗后,用 0.1M乙酸鈉中的二氨基聯(lián)苯胺(0.04%)與 0.06% H202 混合溶液浸泡六分鐘以觀(guān)察信號(也可添加 2.5%的氯化鎳)。

GFAP抗體-W也適用于 Fluorochrome,LLG 銷(xiāo)售的 BRDU抗體-W可視化方案。但是,可以使用 4% FA 灌注組織代替新鮮冷凍切片。

BrdU 抗體-W 使用指南和方案

概述:

該抗體與合成的胸苷類(lèi)似物 BrdU 發(fā)生反應,當 BrdU 注射到動(dòng)物體內時(shí),它會(huì )在細胞周期的S期被整合到活躍增殖細胞的新合成DNA 鏈中??梢酝ㄟ^(guò)免疫細胞化學(xué)測量存活的細胞數量。作為評估一組細胞增殖狀態(tài)的出色工具,它已成為藥物發(fā)現研究的關(guān)鍵,尤其是在癌癥治療和 ADME/TOx 研究期間確定細胞健康狀況方面。BrdU 抗體-W 是在兔體內產(chǎn)生的多克隆抗體,可抵抗與牛血清白蛋白(BSA)結合的 BrdU。我們的抗體已用于大鼠腦組織的免疫細胞化學(xué)。它將與吸收了 BrdU 的濾紙一起出售,用于阻斷。這使研究人員能夠確認特定信號。

BrdU 抗體-W 的表征

image.png

A.成年大鼠齒狀回中的 BrdU 陽(yáng)性細胞(60X),之前已注射 BrdU。共聚焦顯微鏡拍攝的照片B.齒狀回中的 BrdU 阻斷

通過(guò)進(jìn)行陽(yáng)斷研究確定特異性。將之前注射過(guò) BrdU 的成年大鼠海馬的相鄰切片單獨與 BrdU 抗體-W(A-60X)孵育,或與與 BrdU 預孵育的 BrdU 抗體-W(B-60X)孵育。注意A中的標記和 B中的無(wú)標記,表明抗體阻斷的特異性。

儲存和準備:

您收到的試劑瓶中含有約 200ml的稀釋度為 1/100 的試劑。BrdU Antibody-W可在 BSA稀釋劑(50mM KPBS、0.4%Triton、1% BSA、1% NGS)中進(jìn)一步稀釋至至少 1/80,000。

抗體應儲存在 -20C下。還包括用 BrdU 吸附的用于封閉的濾紙??蓪?500m1稀釋抗體加入試管中,以達到 10 μM 封閉。在應用于

組織之前,在室溫(RT)下孵育至少1小時(shí)。該抗體特異性地封閉 BrdU,而不會(huì )封閉濾紙上吸附的其他肽。

勢議:

將新鮮冷凍的 10-80 微米切片在 4%多聚甲醛(EA)中在室溫下固定1小時(shí),在磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)中清洗,然后在 65C下用50% 甲酰胺/2X SSC(300 mM 氫化鈉和 30 mM 檸檬酸鈉)處理 2小時(shí)。將切片在 2X SSC 中清洗,在 37C下在 2N HCL中孵育 80 分鐘,然后在室溫下直接放入 100mM 硼酸鈉(pH 8.5)中 10 分鐘。將切片在 PBS 中清洗,并與 PBS 中的 0.1至 0.3%H202.孵育 10 至 80 分鐘。再次在 PBS 中清洗組織,然后用親和素/生物素陽(yáng)斷試劑盒(Vector-cat #SP-2001)處理,清洗并與BSA 稀釋劑在室溫下孵育1小時(shí)。將 BrdU 抗體-W(1/30,000)在室溫下過(guò)夜應用于組織。在 PBS 中清洗后,將切片在室溫下在1/1000 的生物素化 GAR(Vector labs-cat#BA1000)中孵育1小時(shí),

*注意:熒光金、熒光金抗體、熒光紅寶石、KI-67 抗體-W、GEAP 抗體-W和 BrdU 抗體-W 僅供實(shí)驗室研究動(dòng)物或體外試驗研究使用。不得用于人體。這些藥物應僅供定期從事神經(jīng)解剖學(xué)研究和體外試驗的人員或僅用于實(shí)驗室研究的動(dòng)物使用。

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